蜂王浆中10-羟基-2-葵烯酸液相色谱分析
10-羟基-2-葵烯酸是科学家从蜂王浆中分离出一种有机酸，其分子式为C10H18O3，称为10-羟基-2-癸烯酸（简称HAD），是蜂王浆的重要成分之一，是一种特殊的不饱和有机酸，由于这种酸在自然界的其它物质中没有，只存在于蜂王浆中，所以也称为王浆酸。10-羟基-2-癸烯酸含量是蜂王浆质量的重要指标之一，一般含量在1.4%～4%之间，约占总脂肪酸的50%以上。分离出的纯王浆酸呈白色晶体，在新鲜的蜂王浆中多以游离形式存在，性质比较稳定，有很好的杀菌、抑菌作用和抗癌、抗放射的功能。10-羟基-2-癸烯酸大大提高了蜂王浆的保健和医疗的效用。
一、试剂
1.本实验所用水为重蒸馏水；
2.甲醇：分析醇
3.乙醇：优级纯
4.内标物：对羟基苯甲酸甲酯含量99.0%；
5.10-HAD标准品：99.0%以上。使用前应在放有浓硫酸的减压干燥器内减压干燥24h;
6.10-HAD标准溶液：取干燥后的10-HAD标准品约25mg，精密称定，加无水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65mg。
7.盐酸（C=0.03mol/L）：量取0.1mol/L盐酸100ml，加入200ml重蒸馏水中。
8.流动相：甲醇55%+0.03mol/L盐酸10%+水35%
二、蜂王浆中10-羟基-2-葵烯酸液相色谱分析仪器配置：
LC-3000液相色谱仪：配紫外检测器，泵头带冲洗功能；
色谱处理工作软件：能通过电脑键盘输入LC-3000液相色谱仪所有参数，并能对柱温箱参数设定；
色谱柱：C18，250*4.6*10 或250*4.6*5
柱温箱；
离心机：不低于3000r/min，50ml
超声波清洗机；
漩涡混合器；
分析天平：精度0.0001g
三、样品处理
样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀，取约0.5g，置于已称定的50ml容量瓶中，精密称定，加0.03mol/L盐酸1ml和水2ml，置漩涡混合器上混合使样品溶解，加无水乙醇30ml，边加边轻轻摇动，再精密加入内标溶液10ml，并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，立即置超声波中超声15min，或置漩涡混合器上振荡15min，取出，在3000r/min下离心10min后测定。如不能及时测定，应放置在冰箱中冷藏待测。
四、色谱条件
测定波长：210nm；柱温：35度；流动相流速：1ml/min。
五、蜂王浆中10-羟基-2-葵烯酸液相色谱仪分析校正因子测定
精密吸取10-HAD标准溶液0.5、1、2、3、4、5ml至10ml容量瓶中。精密加入内标溶液2ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取此溶液2ul，注入色谱仪，用峰面积比值计算，应呈线性，求出校正因子F。
注：平行试验相对偏差不得超过2.0%
六、样品测定
吸取样品溶液4ul，注入色谱仪，按“内标法"定量。
七、计算
蜂王浆中10-羟基-2-葵烯酸含量按式中计算：
式中：
Ai Ms
X2=F×----×----×100
As Mi
X2---蜂王浆中10-羟基-2-葵烯酸含量%
F----校正因子
Ai---样品中被测组分峰面积
As—试样中内标物峰面积
Ms—内标物质量，单位为克（g）
Mi—样品质量，单位为克（g）
